实验室科研人员教学操作|蛋白质抽提 谁懂啊家人们!WB实验的命真的是蛋白抽提给的😭 条带模糊、背景杂乱、目的蛋白跑不出来,大概率都是抽提步骤出问题! 今天把实验室亲测好用的标准化抽提流程分享给大家,搭配上海威奥生物的神仙试剂,新手也能轻松拿捏高质量蛋白~ ✨ 核心好物先安利 ▫️ 威奥生物RIPA裂解液:强/中/弱三种规格任选!不管是难搞的肌肉组织,还是敏感的细胞样本,都能精准适配,裂解彻底还不破坏蛋白活性 ▫️ 蛋白酶·磷酸酶·PMSF三联装:不用自己凑抑制剂啦!按比例加进去,全方位抑制蛋白降解和去磷酸化,实验成功率直接翻倍 📝标准化操作(记好笔记!) 1. 配工作液:按100:1:1:1比例混合裂解液和三联装抑制剂(1ml裂解液+10μl抑制剂),混匀后冰上备用 2. 样本预处理:组织剪碎直接加裂解液;细胞上层液多就11000r/min离心10min弃上清,液少可直接加 3. 匀浆:圆底管组织用匀浆机,尖底管组织/细胞用超声波仪,每样打3-4次就够 4. 裂解:4℃冰箱孵育,每30min振荡一次,共4-6次,让蛋白充分释放 5. 离心:11000r/min离心10min,组织样本取300μl上清,细胞样本剔除底部沉淀 6. 保存/后续:蛋白液可直接用于浓度测定、电泳,暂不用就-80℃冷冻,别反复冻融 ⚠️ 科研er必看注意事项 ✅ 全程低温操作!器材和试剂提前4℃预冷,减少蛋白变性 ✅ 抑制剂现配现加,不能提前混在裂解液里久存 ✅ 裂解液有刺激性,一定要戴手套口罩,避免直接接触皮肤 用这套流程做实验,每次提出来的蛋白浓度都很稳定,后续跑WB条带清晰又整齐,再也不用为了重复实验熬大夜了~ 科研人找对试剂真的能少走好多弯路!上海威奥生物这套试剂性价比超高,需要的宝子可以了解下,祝大家实验顺利,论文高产!🎉 #WB实验 #wb#蛋白抽提 #裂解液 #科研
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