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珍贵细胞株在细胞培养过程中被细菌污染的急救方案! 在细胞培养的过程中,最让人头疼的莫过于细菌污染——尤其是对于那些构建周期长、尚未保种的珍贵细胞株,如Sg单克隆株、耐药株等。一旦污染发生,多年的心血可能毁于一旦。不过别急着放弃!如果你的细胞虽然遭遇大面积污染,但状态尚可、形态未见明显异常,或许还有抢救的机会! 今天,我们就为大家整理出一套针对此类珍贵细胞株细菌污染的“急救方案”。请注意,本方法主要适用于来源困难、构建耗时的珍贵细胞,常规工具细胞或易获取细胞不建议采用此类处理。 一、抢救前准备 PBS 胰酶 可乐必妥(0.5%左氧氟沙星滴眼液,无菌原装,超净台内分装使用) 完全培养基(需经0.22 μm滤膜过滤,防止二次污染) 二、操作步骤 1、弃去原有培养基,用PBS轻轻润洗细胞3–4次,尽量洗去浮游细菌。 2、加入胰酶进行消化。注意控制时间,以细胞未完全脱落而细菌已大量悬浮为宜,通常为正常消化时间的一半。 3、在显微镜下观察,见到细菌呈悬浮流动、细胞仍贴壁时,即可终止消化。 4、不要吹打细胞!将培养皿稍倾斜,用移液器轻轻吸除胰酶。 5、沿壁缓慢加入PBS,轻柔润洗细胞表面,进一步去除残留细菌,重复2–3次。 6、加入完全培养基,温和吹打使细胞脱落,收集细胞悬液,离心后弃去上清。 7、用新鲜全培重悬细胞,并移入新培养器皿,同时按1:500比例加入0.5%左氧氟沙星滴眼液,置于培养箱过夜处理。 8、第二天观察:若培养液无浑浊,说明抢救初步成功;若仍有污染迹象,可尝试将左氧氟沙星以1:1000比例再次加入,继续杀菌。 9、抢救成功后务必及时撤除抗生素,避免长期使用影响细胞状态。 温馨提示 该方法适用于紧急处理细菌污染,但并不能保证100%成功,后续需密切观察细胞状态,并尽快进行保种。预防优于补救,日常实验中的无菌操作才是避免污染的根本!如果你正在为珍贵细胞污染而焦虑,不妨尝试以上方法,或许能帮你挽回一株珍贵的细胞!#微生物菌种查询网 #细胞培养 #微生物检验 #有趣的知识又增长了#涨知识#科普#省流 #拒绝废话#科普#冷知识#省流
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细胞培养中出现黑胶虫污染怎么处理?全国细胞房上门消杀服务 在细胞培养实验里,细胞培养环境变差、操作不规范都可能引入黑胶虫。它会和细胞共生、竞争生长,严重时让细胞死亡,导致实验结果出错。以往常用氯霉素等抗生素抑制黑胶虫,可不同实验室的黑胶虫有差异,抗生素适用性有限,长期用还会让细菌产生耐药性。用紫外线照射、酒精擦拭培养箱和培养基,操作简单但效果不彻底,紫外线伤人体,酒精会留有害物质。 现在有欧菲姆KVBOX过氧化氢灭菌仪和诺福黑胶虫清除剂,堪称黑胶虫污染的“克星”。欧菲姆KVBOX能把过氧化氢雾化成微米干雾,在密闭空间里无孔不入,短短时间就能灭掉芽孢,穿透HEPA滤网,让生物安全柜、培养箱等内部彻底灭菌,不给黑胶虫及其污染源留活路,还能根据污染情况设置消杀参数。消毒和静置时间短,超省人力,2KG左右,单手就能拿,杜绝二次污染。 诺福黑胶虫清除剂即开即用,能杀灭芽孢、病毒、霉菌等。使用时没刺激味,对细胞、人和环境都友好,不会残留有害物质,也不会让微生物产生耐药性、造成二次污染。润联消杀方案有充分验证资料,符合USP、欧盟GMP和我国法规要求。已经广泛用于传递窗、生物安全柜等设备,成功解决了真菌、噬菌体、支原体衣原体、黑胶虫等多种污染问题,给细胞培养打造可靠环境,让实验结果又准又稳。
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