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狗骨头DNA技术: 传统质粒载体均携带抗生素抗性基因以及DNA复制子等细菌来源的DNA元件序列。当该类质粒转染入真核细胞时,细菌来源的DNA序列可被Toll样受体识别,不仅激发炎症反应,而且部分质粒可通过Toll样受体递送到溶酶体中降解,降低质粒的利用效率。依诺赞生物对传统质粒进行了改造,在骨架序列两侧插入端粒酶TelN的重组序列,并在质粒骨架中插入多个DNA内切酶I-SceI识别序列,然后利用高保真DNA聚合酶Phi29以及引发酶介导的无引物滚环扩增技术对质粒进行扩增,继而利用TelN对滚环扩增后的DNA进行重组切割及连接,形成两个两端具有发卡结构的线性DNA(因形似狗骨头而被命名为狗骨头DNA,dbDNA):骨架部分(即抗生素抗性基因以及复制子)可通过I-SceI及DNA外切酶降解,表达框部分(含启动子、开放读码框以及Poly A序列)不含任何细菌元件,根据目的不同,可用于细胞与基因治疗(CGT)、DNA疫苗、重组病毒包装、mRNA IVT的模板制备。该技术为体外酶促反应,耗时短(2-3天),工艺可放大(可达毫克至克级),可替代传统的大肠杆菌发酵制备技术,特别适合个体化mRNA肿瘤疫苗DNA模板的制备。依诺赞可提供dbDNA制备的相应载体、无引物滚环扩增试剂盒以及dbDNA制备试剂盒。如有需求,请垂询025-58895107 或58895137。
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