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做内源性Co-IP 怕非特异结合多、IP效率低?其实核心关键就在于抗体和磁珠的选择!@辉骏生物 今天直接上视频实操,教会你内源性蛋白Co-IP实验操作全流程,新手可跟着镜头做,避免实验踩坑。❗附上内源性Co-IP实验小tips: 1️⃣ 抗体选择(重中之重):优先选说明书明确标注「可用于IP实验」的内源性抗体,特异性更强、结果更稳;若没有标注,一定要先做预实验验证,避免抗体不适用导致实验白费; 2️⃣ 磁珠选择(决定实验成败):优先选结合效率高、非特异结合少的蛋白A/G磁珠,辉骏生物proteinA/G磁珠(货号FI8302),好用到反复回购,IP结果清晰、背景干净,省去后续很多麻烦; 3️⃣ 样本处理:全程冰上操作,裂解液务必新鲜添加蛋白酶抑制剂+磷酸酶抑制剂,裂解时间把控好,避免过度裂解导致杂蛋白过多; 4️⃣ 抗体-磁珠孵育:先将抗体与磁珠孵育结合,再加入样本裂解液孵育(孵育时间需要根据你目的蛋白的表达水平或者是抗亲和力来进行确定); 5️⃣ 洗涤步骤:至少洗涤3次,每次洗涤后充分磁吸分离,去除未结合的杂蛋白,减少背景干扰,但注意不要过度洗涤,避免目标蛋白流失; 6️⃣ 洗脱与检测:洗脱液中无质谱检测禁忌成分(如高浓度去污剂、强还原剂等等)。 ps:内源蛋白Co-IP实验,选对抗体和磁珠就成功了一半!辉骏生物proteinA/G磁珠,亲测无踩坑,高效省心~ 有需要这款磁珠以及IP-MS质谱鉴定的小伙伴儿可联系我们辉骏生物!#coip #免疫共沉淀 #研究生 #实验室日常 #辉骏生物
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