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生物喵5月前
小鼠胶质瘤模型建立流程 一、实验材料准备 1、实验动物 选择健康、免疫功能正常的小鼠,常用品系如C57BL/6小鼠,6-8周龄,体重18-22g。提前在标准动物饲养环境适应3-5天,保持温度(22±2)℃,湿度(50±5)%,12h光照/黑暗循环,自由摄食和饮水。 2、细胞株 选择合适的胶质瘤细胞株,如GL261细胞,在含10%胎牛血清、1%双抗(青霉素-链霉素混合液)的DMEM培养基,37℃、5%CO₂培养箱中培养,待细胞处于对数生长期用于后续实验。 3、实验器械与试剂 准备微量注射器、立体定位仪、手术器械(手术刀、镊子、剪刀等)、75%酒精、碘伏、戊巴比妥钠、无菌PBS缓冲液等。 二、术前准备 1、小鼠麻醉 使用1%戊巴比妥钠溶液,按0.01mL/g体重的剂量腹腔注射麻醉小鼠。注射后密切观察小鼠反应,待小鼠角膜反射迟钝、四肢肌肉松弛表明麻醉成功。 2、手术区域备皮消毒 将麻醉后的小鼠固定于手术台上,使用电动剃毛器对小鼠头部进行剃毛,范围为双眼连线至双耳连线之间区域。随后用碘伏消毒3次,再用75%酒精脱碘2次。 三、手术操作 1、立体定位仪固定小鼠 将小鼠头部固定于立体定位仪上,调整小鼠位置,使门齿钩位于适当位置,保证前囟和后囟在同一水平面上,以便精确确定脑内注射坐标。 2、颅骨钻孔 在小鼠前囟前1mm、右侧旁开2mm处,用牙科钻进行颅骨钻孔,注意控制钻孔深度,避免损伤硬脑膜。 3、细胞注射 用微量注射器吸取处于对数生长期、密度为1×10⁶-5×10⁶个/mL的胶质瘤细胞悬液3-5μL。将注射器针头垂直插入硬脑膜下3-4mm深度,缓慢匀速注射细胞悬液,注射时间控制在3-5分钟,注射完毕后,停留5-10分钟,再缓慢拔出针头,防止细胞悬液反流。 四、术后护理 1、伤口处理 手术结束后,用碘伏对伤口进行消毒,涂抹抗生素软膏防止感染,并用无菌纱布覆盖伤口。 2、苏醒与饲养 将小鼠置于温暖、安静的环境中苏醒,待小鼠完全苏醒后放回标准饲养笼。术后密切观察小鼠精神状态、饮食、体重变化及有无感染、出血等异常情况。术后前3天每天腹腔注射青霉素(5-10万U/kg)预防感染。 五、模型评估 定期观察小鼠的行为变化,如有无神经功能缺损症状(偏瘫、共济失调等)、癫痫发作等。一般在接种后7-10天开始出现明显行为学改变。 #科普 #医学生 #实验 #科研狗的日常 #科研人的精神状态
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