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深那超声波破碎双歧杆菌(革兰氏阳性菌,壁厚)操作流程: 1. 样品制备: * 离心收集菌体(4°C, 5000-8000 rpm, 10 min),弃上清。 * 预冷PBS或裂解缓冲液重悬菌泥(浓度约10⁹~10¹⁰ CFU/mL)。 * 分装至预冷离心管(体积≤1/3),冰上保存。 2. 仪器设置: * 安装合适钛探头(常用Φ3-6mm),浸入液面1-1.5cm。 关键参数(需预优化): * 功率:300-600W(总功率30%-60%) * 工作/间隔:超声2-4s / 间隔4-8s(占空比30%-50%) * 总时长:5-15 min(全程严格冰浴) * 温度:冰盒覆盖样品≥2/3高度。 3. 超声处理: * 按设定程序循环超声。 * 每1-2 min暂停,涡旋混匀防局部过热。 * 观察状态(泡沫/浑浊属正常)。 4. 效果检测与终止: * 取样检测: * 涂片镜检(碎片增多)。 * 测上清蛋白浓度或ATP释放量。 * 达目标破碎率(通常80%-90%)即停止。 5. 后处理: * 样品立即置冰上。 * 4°C离心(12000 rpm, 10-15 min)。 * 收集上清用于后续。 关键注意: **严格冰浴!防蛋白变性。 * 探头深度适中,防气泡。 * 探头使用前后75%乙醇灭菌。 佩戴耳罩,通风橱操作。 不同菌株需预实验优化参数(小功率短时开始)。 要点:冰浴保护 + 间歇超声 + 低占空比 + 过程监控。 #超声波细胞破碎仪 #细胞粉碎机 #大肠杆菌 #双歧杆菌 #深那仪器
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