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速学!脑片制备的关键步骤|膜片钳|电生理|实验操作全过程 制备脑片步骤: 1. 在振动切片机刀架上安装一把双刃剃须刀片,并用螺钉拧紧到位。 2. 设置切片厚度(脑切片为 300- 400 µm),将切割速度调整到所需设置(如视频中使用 0.15 mm/min)。 3. 把大脑放入预冷的 aCSF 溶液中。 4. 针对海马切片:切掉小脑,为放置大脑提供平坦表面,接着修剪一小部分前额皮质。 5. 用强力胶将大脑(小脑侧)粘到到振动切片机的槽上,使样本皮质面朝向刀片。 6. 在大脑后方、远离振动切片机一侧添加一块琼脂支撑,用于在切片过程中提供结构支撑。 7. 设置切片机的限位,定义切片的开始和停止位置,将振动切片机的频率设置为最大值(100 Hz)。 8. 使用向上摇杆按钮将缓冲液托盘和大脑移动到暴露表面正下方剃刀刀片边缘的位置,然后按开始按钮开始切片,切片操作时不断用冷 aCSF 溶液补充到切片槽内,保持脑组织冷却状态。 9. 若不熟悉大脑解剖结构,参考 Paxinos 和 Watson 的《小鼠大脑图谱》,确保切片正确的大脑区域。 10. 使用胶头滴管将目的区域的脑切片从槽中转移到预先装有冷冻 aCSF 的干净培养皿中。 11. 小心地沿中线将大脑切成两半,再将各个切片转移到预先充满 aCSF 的孵育槽中。 12. 将切片在室温下保存至少 1 小时,使脑组织从切片的机械冲击中恢复。 #铂梅斯 #膜片钳 #脑片 #实验操作 #科普一下
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一分钟学会脑片膜片钳核心流程 一、实验核心流程 1. 脑片制备(切片) 关键操作: 动物深度麻醉后快速取脑,立即放入 4℃预冷、通氧(95% O₂+5% CO₂)的切片液中保护。 固定脑组织于振动切片机,切取 200-400μm 脑片(新生动物偏薄,成年动物偏厚)。 用软毛笔轻柔转移脑片,避免折叠、挤压损伤神经元。 2. 脑片恢复 核心条件: 转移至含通氧 ACSF 的孵育槽,32-34℃恒温恢复 30-60 分钟,重建神经元离子平衡。 恢复后可室温(22-25℃)保存,需在 6-8 小时内完成实验,确保活性。 恢复标志:脑片边缘清晰、无浑浊,神经元形态完整。 3. 膜片钳记录 环境与设备: 记录槽置于防震台 + 法拉第笼内,抗机械振动和电磁干扰。 持续灌流 32-34℃含氧 ACSF(流速 1-2ml/min),维持生理环境。 细胞选择:显微镜下挑选胞体饱满、折光性好的神经元(活性基础)。 关键操作: 电极(全细胞记录电阻 5-10 MΩ)轻触细胞,施加负压形成 1-10 GΩ 高阻封接(Giga-seal)。 电击穿后建立全细胞模式,补偿串联电阻(70%-80%),监测膜电容稳定性。 活性标准:静息电位 &lt;-60 mV,动作电位幅度&gt; 80 mV,信号稳定可靠。 二、实验成功核心要素 结构完整:切片和转移过程避免机械损伤,脑片形态无破损。 活性保障:全程通氧、控温(切片低温 / 恢复与记录恒温),缩短缺氧时间。 稳定封接:电极质量达标、操作轻柔,高阻封接是信号准确的前提。 三、关键参数速记 每个步骤的核心参数以及目的 切片 厚度 200-400μm,4℃切片液 保结构、减代谢损伤 恢复 32-34℃,30-60 分钟 重建神经元活性 记录 灌流温度 32-34℃,封接电阻 1-10 GΩ 维持活性 + 保证信号质量 活性 判断静息电位 <-60mV,动作电位> 80mV 确认细胞功能正常#电生理 #膜片钳 #脑片膜片钳 #科研 #实验
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