荧光免疫层析法和荧光免疫定量的区别

哈喽，各位小伙伴们大家好呀，这里是阿光今天这期视频呢，主要是想分享如何用 image 这软件进行免疫荧光分析，也就是测定他的一个平均荧光强度的检测。 免疫荧光染色呢，是研究特异蛋白抗原在细胞内分布的一种常用实验技术， 通过荧光术所发的荧光可在荧光显微镜下对抗匀进行细胞定位。但是呢，免疫荧光的照片不仅仅可以作为形态写的分析，还能通过检测平均荧光强度对特异性蛋白表达进行半定量分析。 那么在进行平均荧光强度检测之前呢，我们需要清楚平均荧光强度的定义，他的一个定义就是该区域的荧光强度总和除以该 区域的一个面积。接下来呢，我们对它进行一个实操，首先呢打开我们的一个 imagej 软件，打开我们所需要处理的一个数据。 打开之后呢，我们需要对他进行一个呃设置。首先呢在图片这里，我们需要对他图片的一个颜色 就是这里的一个工具进行一个选择，我们需要选择颜色这里点击 ok， 他就会啊调出来一下，就是其实也是对他照片的格式进行一个啊设置。 接下来呢，我们需要对他进行一个呃分通道进行一个呃设置，点击一下他就会跳出三个通道出来了。首先呢，我们需要对他啊一张一张图片的通道进行一个啊处理， 以及计算他的一个荧光分析。首先呢我选择第一个就是红色这个，呃，首先呢，我们需要需要设定他的一个预值吗？我们在 image 这里，在 address， 在预选择预词对他进行一个设定，这种话直接给他设定 auto， 就是自动就可以了，把它关掉。 对了，我们在这里设定日子，我们三个图片的一个预值呢，需要设定成一样的，否则他的一个偏差就会影响我们的一个实验结果，把它关掉。 接下来我们点这个分析，这里给他设定，我们需要测呃设定的一个目标，比如说这里我们选择 real， 就是面积选上，然后这个也选上，这个也选上，就是你选择的跟我的一样就可以了，点击， ok， 点击完之后呢，我们选择 分析，这里选择 master， 它就会跳出一个这样的一个对话框，嗯，这里一个是它的一个面积，这个是它的一个荧光强度，这个就是对它的一个呃，荧光强度的一个棒。定量的一个分析， 也就是我得出了我们图片的一个平均的荧光强度吗？需要注意的一点就是免疫荧光是半定量分析，平将荧光平均荧光强度呢，只能半定量的表针特异性蛋白的一个表达， 但是呢，因为免疫荧光实验中人为因素呢，影响非常大，比如说拍照的时间的曝光啊，焦距啊，而且非特硬性结合的因素也是不能完全消除的。所以我们在拍照的时候呢，以及处理数据的时候，一定要有一个固定的一个标准 和流程，从而减少误差，这的话只是一张图片的一个，呃，就是计算方法，其余的图片也是这样的，你把三个图片都计算出来，然后进行一个加和，然后再除以他的面积，就出就出出来了他的一个平均荧光强度了。 好的，今天的内容就这么多了，感谢大家的收看，希望本期视频对你有所帮助，拜拜！

有很多得了乙肝的粉丝问我啊，到医院去化验，怎么知道自己啊，这个病毒厉害不厉害？是不是在复制？ 那么今天呢，大家一定要知道这个话语呢，乙型肝炎病毒 dna 啊，有的地方叫 hpv dna， 那么这个指标非常重要，反映我们乙肝病毒在体内复制最直接的指标。 我们可以看到这个病人是个乙肝患者，他做了 hbv 的 dna， 我们现在用的都是方法呢，叫荧光定量 pcr 法，这个荧光定量 pcr 法呢，是一种分子生物学的方法，非常灵敏。 我们看这个病人呢，其实是经过我们治疗的，他的结果就是小于这个最最低线，那么这个最低线呢，在不同的医院他的精度是有所不同的，目前呢，能测到最低的 hbv dna 的检测最低线是小于二十 拷贝每毫升的。所以呢，我们作为一个乙肝的患者，要经常关注自己的 hpv dna 这个数字，如果这个数字升高，就要到医院进行进一步的检查和治疗了，因为这个身高啊，就是代表着体内病毒有复制，您听明白了吗？

哈喽，家人们，今天我想聊聊我们常用的蛋白护座的验证方法。。第一呢就是酵母霜砸，我们的护座蛋白 a 和 b 分别连在酵母的 dna 结合浴和激活浴，如果 ab 牵手成功，那么酵母就可以表达出特定的报告金，比如说可以在缺某种氨基酸的培养机上正常生长。。 第二就是免疫工程店，是一个在体内验证蛋白互做的方法，就好像在细胞里面抓娃娃，用抗体抓住目标蛋白 a 跟他手拉手的小伙伴， b 就会跟着被一起拽下来，这个方法可以直接看细胞里的真实互做情况。。第三就是双分子荧光互补。， 荧光蛋白被切成两半，分别连在要验证的蛋白 a 和蛋白 b 上，如果 ab 互做，那么荧光蛋白就可以重组，在显微镜下就可以看到荧光。。第四是铺档，把我们要用的 ab 蛋白先大量的传化出来，，给 a 蛋白装个小标签，比如说 gst 啊、 h， a 啊都可以固定在词珠上，再跟带其他标签，比如说 md。 t 的 b 蛋白溶液混合起来，格楞格楞，如果 a b 互做，就能把 b 蛋白给调出来了。。其实呢，这些方法我们都可以直接去问豆包，他可以给出最基础的方法，还能告诉你怎么做，需要什么设计原理，也可以讲的明明白白。。如果你想知道最新的方法有什么，他的深度思考模式，可以边结合目前的研究进展。， 总结出来最新的方法，他的搜索过程也特别的拟人，思考的时候还会随时去补充信息，更精准，而且更有逻辑。。我们来看看他给出的答案，非常全面，，还写出了每种实验方法的原理和优缺点，以及怎样选择适合的方法，是不是特别好使。。