食品微生物检测菌落数操作流程

你知道菌落总数测试测的到底是什么吗？菌落总数是一个条件性或操作性定义，它和细菌总数可不一样，它指技术在设定条件下能生长的微生物， 像在该温度下不生长的是冷菌，还有经过巴氏杀菌后处于压制死状态的受损但未死亡的微生物都不在技术范围内。菌落总数测试是怎么把看不见的微生物变为数得清的呢？其实分三步， 第一步是样品稀释，用无菌稀释液，如生理盐水或碳酸盐缓冲液，对样品进行一系列梯度稀 释，目的是让最终接种到平板上的微生物数量合适，培养后能形成三十到三百个独立可数的菌落。培养后选择菌落数在三十到三百之间的平板进行技术， 这个范围统计误差最小，最终按公式，均落总数 c、 f、 u、 g 等于平板平均均落数乘以稀释倍数计算结果。均落总数本身不区分细菌种类， 但它是重要的卫生指示指标和质量风向标，它能预测产品保质期与稳定性。微生物是导致食品腐败、化妆品变质的主因，均落总数越容易缩短，越易腐败变质。这里有个常见误区，有人觉得均落总数越高， 产品一定越不安全。其实不绝对，必须结合产品属性判断，而且不同产品标准不同， 饮用水标准及盐新鲜肉类标准相对宽松，不能直接比较。君乐总数测试在很多场景都有应用， 它是评价饮用水源污染和处理效果的关键指标，也用于环境监测、向空气洁净度、工作台面、餐饮具的消毒效果评价。总之，菌落总数测试在食品饮用水环境监测等领域都发挥着重要作用。

现在我们来到了伟业计量的微生物实验室，接下来有请孙老师给我们介绍一下实验开始前需要做哪些准备工作。没问题，检测实验开始前，我们需要确认以下基础设施是否具备， 一、仪器有显微镜、恒温培养箱、水浴锅、烘箱、灭菌锅以及电子天平一夜枪、剪刀、镊子等等。二、玻璃器皿， 如吸管、锥形瓶、培养敏试管等。三、检测所需的各种试剂、药品培养基等，如基础培养基、选择性培养基 以及显色培养机等。四、食品微生物检测环境在食品微生物检测过程中，无菌室的环境十分关键，对样品的检测结果的准确性干扰很大。 根据中国药典附录规定，无菌检查室的洁净度要求为局部一百级的单向层流空气区域内背景环境洁净度为万级。检测前，我们的无菌室也要进行灭菌，灭菌的要求为紫外照射半小时，通风半小时。 五、检验人员衣着要求检验人员进入实验室之前必须穿戴工作衣、工作帽、鞋子、口罩。孙老师，检测前需要做的准备工作还是挺多的嘛。那是当然的，充分的准备工作是做好实验的第一步。

御姐姐 消毒的饭只要是你觉得样品能接触的到的地方你都消。 这个我是不是可以点到那个位置？可以，这旁边可以 先取完样之后再来取那个拆这个 好像这个秤那个勺子的话啊，如果是干的你可以过一下火再来取 哎，然后让 让他冷却一下，不能直接马上就把它放进去。好，然后现在放进去可以取药了。 如果这个样子掉下来要擦台面最好你在取样的时候的话你把它放到旁边去取，不要在正中间的位置。你不是整个台面都擦了吗对不对？ 好，你取下去 要注意啊，你的样品尽量不要粘在那个 b 上面。 come on you。 刚拿出来他肯定还有点温度的呀，但是烫手肯定不会了，三十度以上肯定还用。 这个我可以全部拿出来吗？可以用两个再拿两个，你先作死的复印就拿四个先正常的，你现在的操作应该是先把那个试管先放好，没关系，你先拿都可以。 嗯 好。这个十十的负一次方两个啊，然后我们本来是十的负一次方，为什么让他做四个呢？ 是因为我们那个大量菌群的那个是平板技术法做的，他前面的西式操作跟这个经络总数是一样的，所以他现在多做了两个石头。负一次方的两个吸气度啊，就是四个平板在上面 等会这两个的话就是加那个 vrba 培养机的。就是我们不是配了两个吗？一个是 pca 吗？一个是 vrba 嘛对不对？嗯 因为刚才他那样 子的话是不是就是没有抽到了或者说是掉下去了他就重新再抽，你按住了之后你就少抽一点点距离了对吧。 这个手势他没抽还是他这个本来也很丑。他会啊， 呵呵，这是类级的呀。不是不是不是，他自己平时也不是用这个，他用的是那个一夜管一夜枪来做的，但他现在抽这个也是很顺的。对，他做的好顺别在旁边那个。 我建议你就是做完了之后全部统一来写啊，因为你这样子写的话很容易笔上面的话有粘有去紧或其他的一些风险，而且稀释过程中的操作的话尽量的越短时间就越好 写是后面可以等你稀释完了倒完培养机再写都可以的。 吓死 好麻烦。 他接触过这些的话可能学习好比我容易很多。嗯， 你肯定还要慢慢练习的，你回去之后你说我现在教完你就马上全部都会了，这不现实啊，你不练习你你要是练你要练，平时回去要有机会做你就得做这个东。 这些的话你熟能生巧啊，那他毕竟也是做过一年了呀。他也做一年了。嗯， 那是不是如果是这样的话我这次学这些下次我学糕点很容易。对啊，连学糕点的基本的很多项目都是有雷同的嘞，都是一样的。 嗯，像微生物检验胎也要做，那像水分的话高点也要做，那像比绒啊，还有那个。呃，高点的那个线含量啊。他这一个的话就不一样， 这理化项目会多很多，感官也不相同， 说话的都好熟练。这慢慢练的呀。不是不是说是那个，你看利用他的这个坏习惯，我就说他三四次他也不会改的，因为习惯就是养成的，做这个实验也是一样的呀。 ok， 好，现在是这 负二嘛，你现在还要去做负三呢，你先抽好了之后再来拿嘛。 啊，你小心酒精灯不要烫到你自己了啊， 你酒精灯的话可以往你的右手边那个方向去放，如果你觉得不顺手的情况下啊。 嗯嗯 嗯， 好，注意，这个是两毫升的，没关系，你可以抽一毫升，也可以抽两毫升，这个是做空白，如果是做 负一负二负三的时候你就要注意了，这个是加一毫升的时候加一毫升，不要加过量了 啊，例如你的那个虾仁呢啊，你也可以用两毫升的来抽这个管啊，它里面的那个孔，你到时候在实验室里的时候，你那个一毫升你觉得不好用，你可以用两毫升来做， 你放的时候放就放一毫升，分别放一毫升吧，你也不用错两次了，知道吧，就是你自己要灵活去辨认这个事情啊， 因为别人问你说是我放一毫升两毫升这个东西，你要知道你我是要加一毫升的，不是放两毫升，我两毫升的管，我就是拿十毫升的管来抽，抽一毫升也是允许的。这就是啊，好，帮他去把那个培养剂拿过来， 两个都要培养机不烫，那个是五十度而已的。 好，先把那个 size 拿出来，然后整个拿下来。哎，往上提。是的， 看怎么了， 不是负一负二负三不怎么多了一个负一，我们不是还要做了一个 vip 平板吗？啊，好，放进去给他来，你先把大氧菌群的那个培养值倒进去先。 oh， okay， 我们看到那个视频上面说如果说是样品样渣，就是比较像比较黄色偏黄色的一些产品的话啊就可以再覆盖多一层是不是？嗯，但是例如像你这个白糖的话他就没有这个必要了。 如果是例如像那些糕点面包他有点像黄色的，偏黄色的，或者说是你的虾虾肉的那种虾干虾仁，哎，他有点偏黄色的话你就可以多覆盖一层上去。 如果你不确定他是不是长菌的话第一天之后你不确定他会不会长菌的话也可以再覆盖多余长。嗯好，放好了之后直接摇匀他，哎左三圈右三圈，哎。好嘞， 那他是零过后。呃，对在上面再再倒着一层上去就第二天的时候去看好这两个先推到角落上去先啊。 好，我们现在做经络总数的 晃动的时候尽量幅度不要太大啊，然后他水溶液会自己在晃的 看一下。 你发现问题了哈，觉得有点少是不是？嗯， top 明天早上你一来到之后的话自己先准备好在这里面再练习操作一下啊，因为明天我接着 就讲那个技术的了，然后会进行这些毒素，第一天的话看他的一个判定他的一个结果，所以的话那个时间会比较紧凑。上午的话你有空自己先来了之后就自己先进来，自己先在这里操作，因为你今天是没有操作完整的一个操作，他已经操作第二遍了。嗯 好， ok， 把酒精灯关了， 你想知道你做了多长时间？不，半个钟。

第一步，配置生理盐水。我们将二百五十毫升的蒸馏水置于三角瓶内， 然后趁取二点一五克的入发蜡，然后将入发蜡倒入称有二百五十毫升的蒸馏水蒸，搅拌均匀。 下一步，我们曾搅拌好的生理盐水针，抽取九毫升的生理盐水， 分别注入三根试管，用于样品的基度稀释。我们给他 盖上盖子，用牛皮纸将管口包扎好， 剩余的生理盐水也盖上盖子，用牛皮纸包扎好。第二步，配置培养机。 我们用电子秤秤取五点九克 pca 穷纸， 将它倒入三角瓶中。将二百五十毫升蒸馏水倒入三角瓶中，稀释平板激素琼纸，把它搅拌均匀。搅拌均匀 啊，现在我们搅拌好了，盖上盖子。嗯，牛皮纸包装好， 带入洒净锅。 我们分别把孔子制作好的培养机，还有生理盐水 放入砂菌锅，盖上盖子， 启动设备。

君洛总数试验操作视频配置百分之零点八五的生理盐水，本次称量十七克绿化钠，加入两千毫升三级水， 搅拌均匀，分装九毫升生理盐水， 分装 225 毫升生理盐水， 配置军落总数的 pca 培养机，本次称量 23 5 克， 加入开水一千毫升溶解， 搅拌均匀后分装至锥形瓶， 贴好灭军指示卡，验证灭军效果。 放好物品设定一百二 11 摄氏度，灭军 15 分钟， 开启紫外灯灭菌一小时，灭菌结束后温度降值 80 摄氏度以下方可开启灭菌器查看灭菌，只是卡变黑色，说明灭菌效果 ok。 放入 46 摄氏度水域草保温 物品转移至传递窗，开启紫外灯灭菌一小时，一小时后关闭紫外灯，需通风三十分钟方可进入。 一小时后关闭紫外灯，洗手消毒。 进入吴军市更衣。 取出物品摆放好， 制备简样称粮 25 克样品加入 225 毫升生理盐水， 分别拍打一分钟，使样也均匀。 选择两个适宜稀释度各取一毫升，分别加入无菌培养敏，本次样品需做五平行 军落总数的培养敏， 每米加入 pca 培养机约 20 毫升，如果是未知样品，冷却后可覆盖一层，减小菌络蔓延， 凝固后转移至培养箱 36 摄氏度到只培养 48 小时，记录好时间 技术与记录 原始记录。